本书研究从2003年发酵生产的保存良好、风味正常的酸白菜中，进行乳酸菌分离和鉴定。以鉴定后的Lactobacillus plantarum为出发菌株，经没有正选择标记的基因敲除方法，使植物乳杆菌的D-乳酸脱氢酶基因失活，建立了工程菌。工程菌的L-乳酸脱氢酶活力占总乳酸脱氢酶活力的比例提高92.5％，L-乳酸的比例提高到75.7％。对工程菌的培养基进行优化，15 L发酵罐中试发酵，得72 h最高产酸量31.1g/L，产酸率比优化前提高了40.1％。应用于发酵黄瓜，使L-乳酸的比例提高了14.8％。

从发酵酸菜中分离得到植物乳杆菌，通过基因敲除，使植物乳杆菌的D-乳酸脱氢酶基因失活，建立了工程菌。工程菌的L-乳酸脱氢酶活力占总乳酸脱氢酶活力的比例提高到92.5％，L-乳酸的比例提高到75.7％。对工程菌的培养条件进行优化，15 L发酵罐中试发酵，得72 h最高产酸量为31.1 g·L-1，产酸率比优化前提高了40.1％。应用于发酵黄瓜，使L-乳酸的比例提高了14.8％。

1 绪论

 1.1 乳酸的理化性质

 1.2 L-（+）-乳酸及其应用

 1.3 L-乳酸生产的研究

 1.4 发酵法生产L-乳酸的研究

 1.5 植物乳杆菌的作用与应用

2 乳酸菌的分离和初步鉴定

 2.1 乳酸菌的分离纯化

 2.2 形态学鉴定

 2.3 乳酸菌的生化鉴定

 2.4 LactobacillusplantarumHF1生长产酸特性的研究

3 产高比例L-（+）-乳酸植物乳杆菌工程菌的构建

 3.1 乳酸脱氢酶的催化反应机理

 3.2 乳酸脱氢酶分子生物学研究

 3.3 基因敲除的原理和在微生物育种上的应用

 3.4 L-（+）-乳酸高产植物乳杆菌工程菌的构建

 3.5 工程菌表达特性的研究

4 工程菌产乳酸发酵条件的优化

 .1 L.plantarumHF1.1培养基的优化

 4.2 发酵条件的优化

 4.3 分批中试发酵的研究

 4.4 补料发酵的研究

5 工程菌用于发酵黄瓜的研究

 5.1 HF3和HF5生长曲线的研究

 5.2 HF3和HF5最适生长温度的研究

 5.3 菌种耐盐试验

 5.4 混合菌种发酵试验

 5.5 工程菌与野生菌对比试验

 5.6 黄瓜中试发酵试验

6 工程菌构建与应用的探讨

 6.1 发酵蔬菜中乳酸菌的分离和鉴定

 6.2 植物乳杆菌HF1和HF1.1乳酸脱氢酶的测定

 6.3 植物乳杆菌HF1和HF1.1乳酸旋光性的测定方法

 6.4 基因敲除法建立植物乳杆菌工程菌的可行性探讨

 6.5 敲除载体的构建

 6.6 转化子的筛选和鉴定

 6.7 工程菌表达的特点

 6.8 工程菌发酵条件的优化

 6.9 多菌株联合发酵生产乳酸黄瓜134

参考文献137

附录164

 附录Ⅰ 培养基164

 附录Ⅱ 试验菌株169

 附录Ⅲ 仪器、设备和试剂170

 附录Ⅳ 试剂配制172